Padronização de um ELISA indireto a partir da utilização de uma proteína de superfície do vírus da anemia infecciosa equina como antígeno para o diagnóstico dessa enfermidade / Standardization of an indirect ELISA using a surface protein of the equine infectious anemia virus as an antigen for the diagnosis of this disease

A anemia infecciosa equina é uma importante enfermidade que acomete os equídeos em todo o mundo, se apresentando de forma aguda, crônica e assintomática causando grandes prejuízos para a economia tanto para criadores que vivem do trabalho desses animais quantos aos criadores que investem no melhoramento das raças, impedindo o acesso ao mercado tanto nacional quanto internacional. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento considera o IDGA como teste oficial para diagnóstico dessa enfermidade, porém essa técnica é demorada e muita vez acaba sendo subjetiva, dependendo da experiencia particular de cada Laboratorista. Além de não conseguir detectar animais no início da infecção. Logo, a necessidade de se buscar novas técnicas como o ELISA indireto que aperfeiçoem o tempo de análise dos resultados, facilita a automação e obtém resultados confiáveis. O estudo realizado teve como objetivo padronizar uma técnica de ELISA indireto utilizando uma proteína de envelope viral GP90 como antígeno para diagnóstico da anemia infecciosa equina. Avaliando o desempenho do teste a partir da sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo. Os valores obtidos foram: 91,11%, 93,33%, 91,11% e 93,33% respectivamente. Concluiu-se que o teste apresenta bom desempenho, além da possibilidade de detectar amimais positivos no início da infecção.

Equine infectious anemia is an important disease that affects horses all over the world, presenting in an acute, chronic and asymptomatic way, causing great damage to the economy, both for breeders who live off the work of these animals and for breeders who invest in the improvement of breeds, preventing access to both national and international markets. The Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply considers AGID to be the official test for diagnosing this disease, but this technique takes time and often ends up being subjective, depending on the particular experience of each laboratory worker. In addition to not being able to detect animals at the beginning of the infection. Therefore, the need to seek new techniques such as indirect ELISA that improve the time of analysis of results, facilitate automation and obtain reliable results. The aim of this study was to standardize an indirect ELISA technique using a GP90 viral envelope protein as an antigen for the diagnosis of equine infectious anemia. Evaluating test performance based on sensitivity, specificity and positive and negative predictive values. The values obtained were 91.11%, 93.33%, 91.11 and 93.33 respectively. It was concluded that the test performs well, in addition to the possibility of detecting positive animals at the beginning of the infection.

Padronização de um teste ELISA indireto para diagnóstico da cinomose canina / Standardization of an indirect ELISA test for canine diagnosis diagnosis

A cinomose é uma enfermidade causada pelo vírus Canine Distemper Virus (CDV). Essa doença afeta principalmente cães, mas também acomete outras espécies domésticas e selvagens. A imunidade do animal está relacionada ao grau que a esse patógeno vai atingir o organismo do indivíduo. Ela afeta a respiração do animal, pode causar vômito, diarreia, convulsões, podendo levar o animal à óbito. O objetivo do presente trabalho foi padronizar um teste ELISA indireto com antígeno de superfície para o diagnostico cinomose utilizando amostras de soro canino. Para padronização da técnica, fez-se necessário o estudo da diluição do antígeno para identificar a melhor concentração para sensibilização da placa. O teste foi aplicado primeiramente com diferentes diluições do antígeno para detecção do melhor desempenho do antígeno. Feito isso, foi testado em um banco de soro de 45 animais comprovadamente positivos no teste ELISA comercial e em soro de 45 animais comprovadamente negativos no teste ELISA comercial, posteriormente foi calculado o ponto de corte, especificidade e sensibilidade do teste. O teste ELISA indireto se mostrou com excelência como um teste de diagnóstico para a cinomose canina, obtendo-se ponto de corte de densidade óptica de 0,229, sensibilidade de 95,5% e especificidade de 84,4%.

Distemper is a disease or the disease by the CDV virus, Distemper Virus. This disease mainly affects dogs, but also affects other domestic and wild species. The animal's immunity is related to the degree to which it will reach the individual's organism. It affects the animal's breathing, can cause vomiting, diarrhea, convulsions, and can lead to death. The aim of the present work test was to standardize an indirect ELISA for distemper diagnosis in experiments using a surface antigen. For the study of technical identification, it was necessary to specify the antigen for the best concentration of plaque sensitization. The test was initially applied with different dilutions of the antigen to detect the best performance of the antigen. This was tested in a serum bank of 45 animals proven positive in the commercial ELISA test and in the serum of 45 animals proven negative in the commercial ELISA test, later it was tested on the cut-off point, specificity and sensitivity of the test. The indirect ELISA test proved to be excellent as a diagnostic test for canine distemper, with an optical density cut-off of 0.229, sensitivity of 95.5% and specificity of 84.4% being obtained.

Levantamento sorológico de brucelose em bovinos monitorados no estado da Bahia / Serological survey of brucellosis in cattle monitored in the estate of Bahia

A brucelose é uma doença bacteriana de grande importância para a economia pecuária e para a saúde pública por se tratar de uma zoonose. É uma doença infecto-contagiosa que tem com agente etiológico bactérias do gênero Brucella. Em bovinos, as espécies do gênero é a Brucella abortus, que são cocobacilos gram negativo, intracelulares facultativos, imóveis e não esporulado. A infecção apresenta evolução crônica e acomete animais de todas as idades, sendo mais frequente em indivíduos sexualmente maduros. O objetivo desse trabalho é investigar, por meio da sorologia para brucelose bovina, utilizando a técnica do ELISA indireto, amostras de animais reagentes abatidos em frigoríficos inspecionados no estado da Bahia. Foram utilizados 666 animais, selecionados aleatoriamente no momento do abate. O sangue foi coletado com finalidade de obtenção de soro, todas as amostras foram submetidas à prova de triagem do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), prova do 2mercaptoetanol (2-ME) e ELISA Indireto. Das amostras reagentes no teste do AAT, obteve-se uma prevalência estimada em 1,2%. A prevalência no teste do ELISA foi de 13,21% (n=86). Esse resultado sugere a ocorrência de falsos negativos quando se utiliza a prova do antígeno acidificado tamponado.

Brucellosis is a bacterial disease of great importance to the livestock economy and to public health because it is a zoonosis. It is an infectious disease that has etiologic agent with bacteria of the genus Brucella. In cattle, the species of the genus Brucella is Brucella abortus that are gram negative, facultative intracellular, real estate and not sporulated. The infection presents chronic and affects animals of all ages, being more frequent in sexually mature individuals. This study aimed to investigate through serology for brucellosis, using the technique of indirect ELISA, samples from positive animals slaughtered in slaughterhouses inspected in the state of Bahia. A total of 666 animals were used, randomly selected at the time of slaughter. Blood was collected in order to obtain serum, all samples were subjected to a screening test Antigen Buffered Acidified (AAT), proof of 2-mercaptoethanol (2-ME) and Indirect ELISA. Of reagents in the test samples of AAT obtained an estimated prevalence of 1.2%. The prevalence in the ELISA test was 13.21% (n = 86). This result suggests the occurrence of false negatives when using the buffered acidified antigen test.

Monitoring of Newcastle disease in poultry at migratory birds landing sites: Mangue Seco and Cacha Pregos between 2013 and 2014 / Monitoramento da doença de Newcastle em aves domésticas nos sítios de pouso de aves migratórias: Mangue Seco e Cacha Pregos entre 2013 e 2014

The poultry industry has been considered one of the most efficient agricultural activities, placing Brazil in the ranking of the largest producers of chicken meat. However, a threat to the poultry production chain is the entrance of Newcastle disease virus (NDV) in the country, which would bring huge economic and social losses. Monitoring of the virus was conducted in domestic poultry (Gallus gallus domesticus) farms on the migratory birds landing sites Mangue Seco and Cacha Pregos between 2013 and 2014 to control Newcastle disease (NCD) in these locations. Activities in health education, filling the questionnaire to define the sanitary profile of the farms, georeferenced registration and collection of blood samples, cloacal and tracheal swabs of the backyard birds were the epidemiological surveillance actions performed. A total of 133 serum samples were analyzed in Mangue Seco and 81 in Cacha Pregos. The results showed that both Mangue Seco (63.4%) and Cacha Pregos (88.9%) presented reactive animals for the NDV. The results of real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and viral isolation analyses were negative, proving that the domestic poultry were not eliminating the virus at the time of sample collection. The high percentage of reactive animals by indirect ELISA test in both epidemiological units studied suggests the presence of NDV circulating lentogenic strain, since there was no death registration and the birds did not have characteristic symptoms of the disease.(AU)

A avicultura tem sido considerada uma das atividades agrícolas mais eficientes, colocando o Brasil no ranking dos maiores produtores de carne de frango. No entanto, uma ameaça à cadeia produtiva da avicultura é a entrada do vírus da doença de Newcastle (NDV) no país, o que acarretaria enormes prejuízos econômicos e sociais. O monitoramento do vírus foi realizado em granjas de aves domésticas (Gallus gallus domesticus) nos locais de desembarque de aves migratórias de Mangue Seco e Cacha Pregos entre 2013 e 2014 para controlar a doença de Newcastle (DCNT) nesses locais. Atividades de educação em saúde, preenchimento de questionário para definição do perfil sanitário das fazendas, cadastro georreferenciado e coleta de amostras de sangue e swabs cloacal e traqueal de aves de quintal foram as ações de vigilância epidemiológica realizadas. Um total de 133 amostras de soro foram analisadas em Mangue Seco e 81 em Cacha Pregos. Os resultados mostraram que tanto Mangue Seco (63,4%) quanto Cacha Pregos (88,9%) apresentaram animais reativos para o NDV. Os resultados da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) e das análises de isolamento viral foram negativos, comprovando que as aves domésticas não estavam eliminando o vírus no momento da coleta das amostras. O alto percentual de animais reativos pelo teste ELISA indireto em ambas as unidades epidemiológicas estudadas sugere a presença de cepa lentogênica circulante de NDV, uma vez que não houve registro de óbito e as aves não apresentavam sintomas característicos da doença.(AU)

Daily rhythms after vaccination on specific and non-specific responses in Nile tilapia (Oreochromis niloticus).

We evaluated the daily changes in immunological and hematological factors in tilapia (Oreochromis niloticus) after an immunization period with a subsequent challenge. Experiments were divided into two phases: Phase 1 (immunization): 144 fish were distributed into two groups with 72 fish in six tanks. One group (T1) was immunized, comprising six vaccination time points (ZT schedule = ZT2 h, ZT6 h, ZT10 h, ZT14 h, ZT18 h, ZT22 h). The same schedule was applied to the other group, but with saline solution (non-vaccinated: T2). Both groups remained in the laboratory for 30 days (considered the immunization period). Phase 2 (challenge): on day 30, both vaccinated and non-vaccinated groups were challenged with Streptococcus agalactiae (2.0 × 107 CFU mL-1) following the same ZT schedule to stimulate the immune response without leading to widespread infection and mortality. On day 45, blood and head kidney samples were collected during the same ZT schedule. The variations in time of the following parameters within each group were evaluated: hematology, peroxidase activity, IgM, tnf-α3, tgf-ß1, il-1ß and il-12 gene expression. No significant mortality was observed for the groups or the ZT schedule (p > 0.05). Daily rhythms with diurnal acrophases were found in T2 for il12, tnf-α3 and tgf-ß1 expression gene, while the acrophases of the peroxidase level, hematocrit and thrombocytes were at nighttime (p < 0.05). In contrast, most of the parameters in the vaccinated tilapia showed no daily rhythms (p > 0.05), except IgM. For all the parameters, the interaction effect between time and treatment (vaccinated and non-vaccinated groups) depended on ZT. Our results reveal that the humoral and non-specific immune system displayed a circadian rhythm based on the light-dark cycle, which could be affected by the vaccination procedure in tilapia.

Synchronization to light and mealtime of daily rhythms of locomotor activity, plasma glucose and digestive enzymes in the Nile tilapia (Oreochromis niloticus).

The light-dark cycle and feeding can be the most important factors acting as synchronizers of biological rhythms. In this research we aimed to evaluate synchronization to feeding schedule of daily rhythms of locomotor activity and digestive enzymes of tilapia. For that purpose, 120 tilapias (65.0±0.6g) were distributed in 12 tanks (10 fish per tank) and divided into two groups. One group was fed once a day at 11:00h (zeitgeber time, ZT6) (ML group) and the other group was fed at 23:00h (ZT18) (MD group). The fish were anesthetized to collect samples of blood, stomach and midgut at 4-hour intervals over a period of 24h. Fish fed at ML showed a diurnal locomotor activity (74% of the total daily activity occurring during the light phase) and synchronization to the feeding schedule, as this group showed anticipation to the feeding time. Fish fed at MD showed a disruption in the pattern of locomotor activity and became less diurnal (59%). Alkaline protease activity in the midgut showed daily rhythm with the achrophase at the beginning of the dark phase in both ML and MD groups. Acid protease and amylase did not show significant daily rhythms. Plasma glucose showed a daily rhythm with the achrophase shifted by 12h in the ML and MD groups. These results revealed that the feeding time and light cycle synchronize differently the daily rhythms of behavior, digestive physiology and plasma metabolites in the Nile tilapia, which indicate the plasticity of the circadian system and its synchronizers.

Análise espacial dos dados do programa de profilaxia da raiva no município de Lauro de Freitas, Bahia, Brasil, no período de 1999-2004 / Geospatial analysis of the data of the rabies control program in Lauro de Freitas municipality, Bahia, Brazil, during 1999-2004 / Análisis espacial de los datos del programa de profilaxia de la rabia en Lauro de Freitas, Bahia, Brasil, en el período 1999-2004

A elevada letalidade e o número de pessoas vacinadas tornam a raiva umproblema de saúde pública mundial. Inadequados sistemas de informação e vigilância epidemiológica não permitem conhecer a magnitude real do problema. Geotecnologias aplicadas na saúde pública caracterizam e quantificam a exposição a doenças e seus possíveis determinantes, tendo a análise espacial como instrumento importante nesta avaliação.Este estudo objetivou traçar o perfil epidemiológico das agressões por animais, em Lauro de Freitas, Bahia, Brasil, entre 1999-2004, para identificar áreas de risco e subsidiar ações educativas efetivas e específicas para a prevenção da raiva. Observou-se aumento no registrode agressões, provavelmente pelo estímulo a notificação, sendo principalmente por cães, sem raça definida, com proprietário, nos finais de semana, especialmente nas férias de verão. A informação fornecida pelo paciente, durante o atendimento, possibilita erros na prescrição daprofilaxia da raiva humana. O estudo identificou que os Distritos Centro e Itinga apresentam maior densidade populacional, assim como maior número de ocorrência de agressões e incidências. Em análise espacial identificaram-se dois grupos de aglomerados de risco: o Distrito Centro eo aglomerado secundário composto pelos Distritos de Areia Branca e Itinga, localidades que devem ser identificadas como áreas prioritárias para o controle da raiva no município.

The high mortality rate and the number of people vaccinated make rabies aproblem of public health worldwide. Inadequate information and epidemiological surveillance do not reveal the real magnitude of the problem. Geo-technologies applied in public health characterize and quantify exposure to diseases and their risk factors, having spatial analysis as an important part in this evaluation. This study aimed to trace the epidemiological profile of attacks by animals in Lauro de Freitas, Bahia, Brazil, between the years 1999-2004, identifying areas of risk, thereby subsidizing effective educational and specific actions for prevention ofrabies in this county. There was an recorded increase of aggression in the period, probably by an increase in the reporting, mainly by dogs, without defined breed, with their owners, on weekends, especially during summer vacations. Evidence shows that the information providedby the patient during his appointment enable errors in prescription of human prophylaxis. The geo-processing and statistical analysis identified that the Central Districts and Itinga, have the highest population density, as well as many of the occurrence of attacks and incidents. Two groups of risks were identified, the Central District and a secondary cluster composed of two other Districts, Areia Branca and Itinga. These locations are identified as priority areas for control of rabies in Lauro de Freitas, Bahia, Brasil.

El alto índice de mortalidad y el número de personas vacunadas hacende la rabia un problema de salud pública en todo el mundo. Inadecuados sistemas de información y vigilancia epidemiológica no permiten conocer la magnitud real del problema. Geotecnologías aplicadas en la salud pública caracterizan y cuantifican la exposición a enfermedades y sus posibles determinantes, teniendo el análisis espacial, como herramientaimportante en la evaluación. Este estudio tuvo como objetivo determinar el perfil epidemiológico de las agresiones por animales, en Lauro de Freitas, Bahía, Brasil, entre 1999- 2004, para identificar zonas de riesgo y subsidiar acciones educativas efectivas y específicas para la prevención de la rabia. Se observó un aumento en el registro de las agresiones,probablemente debido al estimulo de la notificación, siendo estas, principalmente por perros, sin raza definida, con propietario, durante los fines de semana y especialmente durante las vacaciones de verano. La información proporcionada por el paciente, durante el tratamiento,lleva a errores en la prescripción de la profilaxia de la rabia humana. El estudio identificó que los Distritos Centro e Itinga, presentan una mayor densidad poblacional, así como un mayor número de ocurrencias e incidencias de agresion. En el análisis espacial se identificaran dosgrupos de aglomeración de riesgo: el primero incluye el Distrito Centro y el grupo secundario compuesto por los Distritos de Areia Branca e Itinga, localidades que deben ser identificados como áreas prioritarias para el control de la rabia en la ciudad.

Geotecnologias na análise da população canina para o controle da raiva,Considerando fatores socioeconômicos e demográficos. Município de Lauro de Freitas (BA) 1999 -2004 / Geospatial analysis of canine population in relation to socioeconomic And demographic factors in Lauro de Freitas (BA), during 1999 -2004

A análise da população canina de um município representa um instrumento indispensável para o controle da raiva e outras zoonoses, que tenham o cão como reservatório.Este trabalho teve como objetivo analisar a população canina do município de Lauro de Freitas (BA), no período de 1999 a 2004, levando em conta os dados socioeconômicos e demográficos de cada distrito sanitário do município. Foi utilizado o histórico vacinal de Lauro de Freitas (BA) entre 1999 e 2004, e os dados do último Censo Demográfico no ano 2000. O estudo possibilitou o dimensionamento, localização e caracterização adequada da população canina. Foi constatado que a população canina estimada no período, conforme orientação do Ministério da Saúde estava subestimada em 25,7%, representando 15,7% da população humana. Verificou-se também grande variação da população canina entre os Distritos Sanitários, com maior concentração em Areia Branca (39,2%), área rural do município, onde as condições socioeconômicas eram inferiores e a menor no distrito de Ipitanga (2,7%), local com características de veraneio. Concluiu-se que a alta proporção de cães no município pode estar relacionada com o tipo de moradia, principalmente horizontal, com predominância de domicílio tipo casa.

The analysis of a municipality canine population is an indispensable for the control of rabies and other zoonosis, which have the dog as a reservoir. Demographic and socioeconomic factors were considered because the relation of those with the health condition of population has been widely mentioned in several studies. Geotechnology applications to public health matters allow better characterization and quantification of exposure to diseases and their possible risk factors. This study was based on the vaccination history in Lauro de Freitas, Bahia, Brazil (1999 to 2004) and on the last 2000 Population Census data. It noted that the canine population during that period was underestimated by 25,7% in relation to official estimate, representing 15,7% of human population, variation between the districts, with a greater concentration in the municipality s rural area of Areia Branca (39,2%), where the socioeconomic conditions were lower. The district of Ipitanga had the lowest percentage (2,7%). The high proportion of dogs in the place could be linked to the housing type, which is predominantly horizontal in structure.

Avaliação da resposta imune humoral em caprinos inoculados com uma vacina viva atenuada liofilizada contra Corynebacterium pseudotuberculosis / Evaluation of the goats humoral immune response induced by the Corynebacterium psudotuberculosis lyophilized live vaccine

A linfadenite caseosa (LC), comumente chamada de mal-do-caroço, é uma doença que acomete ovinos e caprinos e tem como agente etiológico Corynebacterium pseudotuberculosis. É um patógeno intracelular facultativo de macrófagos e é filogeneticamente relacionado com Mycobacterium tuberculosis. É uma doença de ocorrência mundial, caracterizada por formação de lesões necróticas encapsuladas caseosas, localizada principalmente nos linfonodos externos e pulmões. A transmissão se dá provavelmente através da pele, pelo contato de animais sadios com animais portadores de abscessos que evoluem a supuração. Eventualmente, tem sido encontrada em bovinos, porém é em ovinos e em caprinos que assume importância econômica e sanitária. Machos e fêmeas podem apresentar a doença em qualquer estação, porém encontram-se mais doentes com o desenvolver da idade, principalmente após um a dois anos de vida. A enfermidade causa sérios prejuízos a essas espécies, constituindo uma limitação zoopatológica às suas explorações. Com cerca de 80 por cento do rebanho nacional, a região Nordeste é a maior detentora de caprinos do Brasil, onde esses animais são essenciais ao sustento do pequeno agricultor. Corynebacterium pseudotuberculosis causa consideráveis prejuízos econômicos à região, que vão desde a condenação de pele e carcaças em razão de abscessos, até perdas em eficiência na reprodução ou na produção de carne e leite. O presente trabalho teve como objetivo avaliar em caprinos a resposta imune humoral induzida pela vacina viva liofilizada, elaborada com a cepa 1002, da Empresa Baiana de Desenvolvimento Agrícola (EBDA). Os resultados evidenciaram que o referido preparado liofilizado promove a produção de anticorpos específicos em doses iguais ou maiores do que 109 CFU e que o tratamento ministrado não provocou lesões nos animais vacinados.

Serological survey for bovine herpesvirus 1 in cattle from different regions in the state of Bahia, Brazil

The presence of antibodies against BHV-1 was evaluated in young bovines from fifteen different counties distributed along North, South and Central regions of the state of Bahia. Bovines with age ranged from 1 to 4 years old, non-vaccinated against BHV-1 and without diagnostic of BHV-1 infection were chosen for blood collection. A total of 558 serum samples were collected equivalent to 10 percent of the population in each farm. The sera were submitted to ELISA (HerdCheck-IDDEX) and Microserum neutralization (MSN) tests. The MSN was performed in monolayers of MDBK cells in microplates using Los Angeles BHV-1 strain. The results of serum samples by ELISA showed that 56 percent (314/558) were positive and 44 percent (244/558) were negative. The sera assayed by MSN showed that 48 percent (269/558) were negative and 52 percent (289/558) were positive. These positive sera demonstrated that 54 percent had serumneutralization titer between 4-16, 35 percent between 32-64 and 11 percent 3 64. Our results suggest that the virus is circulating actively in herds. Furthermore, the high diffusion of the BHV-1 in young bovines could represent a constant source of viral infection in the herd